ЭКСПРЕССИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА BRUCELLA ABORTUS ОМР16 В РАСТЕНИИ NICOTIANA BENTHAMIANA - Ilgekbaeva Gulnaz D.,; Makhashov Edil Sh.,; Tulepova Gulmira,; Yessimkhankyzy Dana,; Sadiev Sagypash T., (Academic Journal of Physical and Chemical Sciences, 2020)
Бруцеллез – одно из самых заразных и инфекционных заболеваний с высокими показателями заболеваемости крупного рогатого скота и человека в Казахстане. Использование современных биотехнологических методов для разработки надежных и доступных для фермеров вакцин является альтернативой для решения проблемы. В качестве вектора для получения экспрессии антигенов возбудителя заболевания часто используют вирусы растений. Среди растительных вирусов широко используется вирус А винограда (ВАВ). При разработке вакцин или диагностических текстов против бруцеллеза, мембранные белки бруцеллы являются основными объектами исследований. Мембранные белки (OMPs) являются специфическими поверхностными антигенами клетки, которые обладают иммуногенностью. OMPs являются идеальными кандидатами для производства рекомбинантных вакцин против бруцеллеза. Объектом исследования являлся белок наружной мембраны (Omp16), который играет важную роль в подавлении выработки TNF-α в макрофагах. В данном исследовании было проведено молекулярное клонирование и анализ экспрессии гена Omp16, которая использована для экспрессии рекомбинантного белка в растениях. В качестве объектов исследований нами были выбраны бруцеллы из вакцинного штамма Brucella abortus 19 и растение Nicotiana benthamiana, который широко используется для производства целевого белка и является модельным растением для молекулярно-генетических исследований. Был сконструирован вирусный вектор для экспрессии бруцеллезного антигена Omp16 в растения Nicotiana benthamiana. Для регенерации трансгенных растений использовалось 19 эксплантов. В результате исследований внесенный ген Omp16 под контроль субгеномного промотора ОРС4 успешно экспрессировался с сохранением эффективности экспрессии в трансгенных растениях. Эффективность вирусных векторов оценивалась на уровне транскрипции экспрессии мембранного белка Omp16 и вирусных белков. Инфильтрацию проводили всей листовой пластинки полностью, плотность агробактерий составила 0.7. Были получены трансгенные растения Nicotiana benthamiana, несущие ген капсидного белка ВАВ, была достигнута экспрессия мембранного антигена бруцеллы Omp16 в вирусном векторе путем замены ОРС4 на ген Omp16. Разработка трансгенных растений была осуществлена с помощью агробактериальной трансформации.